鞘内注射DREAM-shRNA对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛觉过敏的影响

摘要：目的 评价鞘内注射转录因子下游调控元件拮抗分子-短发夹RNA(DREAM-shRNA)对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛觉过敏的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重200 ～ 230 g,进行鞘内置管术.取鞘内置管成功的大鼠60只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=12):假手术组(S组)、骨癌痛组(P组)、骨癌痛+吗啡耐受组(PM组)、骨癌痛+吗啡耐受+空白载体组(PMB组)、骨癌痛+吗啡耐受+ RNAi组(PMR组).左胫骨上段骨髓腔注射Walker 256乳腺癌细胞5m(1×105个/μl)建立大鼠骨癌痛模型.PM组、PMB组和PMR组大鼠于造模后第14～ 18天时皮下注射吗啡,每日单次注射剂量依次为10、20、30、40和60 mg/kg,3次/d,第19天时皮下注射吗啡3 mg/kg.造模后第20天时PM组鞘内注射生理盐水10μl,PMB组鞘内注射慢病毒空白载体5μl+生理盐水5μl,PMR组鞘内注射DREAM-shRNA 5 μ1+生理盐水5μl,1次/d,连续5d.分别于造模前1 d(T0)、造模后7 d(T1)、14 d(T2)、18 d(T3)、19 d(T4)、21 d(T5)、25 d(T6)和28 d(T7)时,记录自发性缩足反射次数和后肢跛行程度评分,测定热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)和机械刺激缩足反射阈(PWMT).造模后第28天痛行为学测定结束后,处死大鼠,取L4脊髓组织,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,测定DREAM mRNA及其蛋白的表达.结果 与S组比较,P组T2-3,5-7时,PM组、PMV组和PMR组T4-6时自发性缩足反射次数增加,后肢跛行程度评分降低,P组T1-3.5-7时,PM组、PMV组和PMR组T1,3-7时PWMT降低,P组、PM组、PMV组和PMR组脊髓DREAM mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.01);与P组比较,PM组和PMV组自发性缩足反射次数T2-3时减少,T4时增加,后肢跛行程度评分T23时升高,T4时降低,PMR组自发性缩足反射次数T2-3,6-7时减少,T4时增加,后肢跛行程度评分T2-3,6-7时升高,T4时降低,PM组和PMV组PWMT T2-3时升高,T4.时降低,PMR组PWMT T2-3,6-7时升高,T4-5时降低,PM组和PMV组脊髓DREAMmRNA及其蛋白表达上调,PMR组脊髓DREAM mRNA及其蛋白表达下调(P＜ 0.01);PM组和PMV组间各时点自发性缩足反射次数、后肢跛行程度评分、PWMT、脊髓DREAM mRNA及其蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05);与PM组和PMV组比较,PMR组T6-7时自发性缩足反射次数减少,后肢跛行程度评分和PWMT升高,脊髓DREAM mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.01).5组间不同时点PWTL比较差异无统计学意义(P＞0.05).PMV组和PMR组脊髓背角有大量绿色荧光,即GFP表达阳性.结论 鞘内注射DREAM-shRNA可减轻骨癌痛-吗啡耐受大鼠的痛觉过敏.